建議血清應保存在-2O℃。若一次無法用完一瓶，無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀龋俜呕乩鋬觥?/p>
將血清從冷凍箱取出后，置于2～8℃冰箱使之緩慢融解，一般是融解過夜。
沉淀主要成分是纖維蛋白和脂蛋白，不會影響血清品質。
首先讓其沉淀在瓶子底部，中上層無沉淀血清直接轉出使用，下層血清裝到50ml無菌離心管，400g，離心3分鐘即可除去 (一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。
稀有的澳洲血清培養(yǎng)嬌貴細胞(小鼠ES、原代細胞分離培養(yǎng))，南美血清或國產(chǎn)胎牛血清用于癌細胞、常規(guī)細胞系培養(yǎng)(用量最大)，新生牛血清用于病毒包裝(構建穩(wěn)轉細胞株)。
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質量!
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察微生物培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，微生物培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關：
(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;
(2)血清質量不好，反復凍融的結果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長;
(4)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。
EDTA是一種螯合劑，它可以螯合Ca2+ 或Mg2+，而細胞表面很多和培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶結合的蛋白都是帶有Ca2+ 或Mg2+的，把這些離子螯合后，可以加速細胞和培養(yǎng)皿的脫離，促進消化。上皮類細胞的連接存在“橋粒”結構，是細胞間最“牢固”的連接，但橋粒的形成依賴于鈣離子的存在。在胰酶消化細胞時，加入EDTA，可以破壞細胞的橋粒結構，使細胞能夠分散成單個細胞。通俗地說，就是破壞細胞間的粘連。
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。首選DMEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)。另外還可以參考ATCC網(wǎng)站的推薦信息。
從原條件逐漸過度：1/4、1/2、3/4，最后是完全新培養(yǎng)基。
1.培養(yǎng)基內之CO2會逐漸溢出，造成微生物培養(yǎng)基越來越偏堿性。顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。
2.培養(yǎng)基偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。需調整pH值至~7.2.
37℃，1~2分鐘內全部融解。
冷凍管建議放在液氮液面上面，由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全(戴護目鏡)，預防冷凍管之爆裂。
可能原因：
(1)胰蛋白酶消化過度
(2)支原體污染
(3)消化液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當
(4)細胞老化(如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性)
(5)接種細胞起始濃度太低或太高
解決辦法：
(1)縮短消化時間或降低胰蛋白酶濃度
(2)如發(fā)現(xiàn)支原體污染，及時丟棄培養(yǎng)物。
(3)重新配置消化液或培養(yǎng)液
(4)復蘇新的保種細胞
(5)調節(jié)最佳接種細胞濃度
